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    SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳用途分析以及測試中常見問題
    來源:測試GO 時間:2022-11-03 10:20:43 瀏覽:7539次

    SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳因為操作簡單,所以具有廣泛的用途。SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳是許多研究領(lǐng)域的重要的分析技術(shù)。

    cas12a蛋白聚丙烯酰胺凝膠電泳和蛋白質(zhì)免疫印記結(jié)果

    SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳用途:

    1.蛋白質(zhì)純度分析;

    2.蛋白質(zhì)分析量的測定,根據(jù)遷移率大小測定蛋白質(zhì)亞基的分子量;

    3.蛋白質(zhì)濃度的測定;

    4.蛋白質(zhì)水解的分析;

    5. 免疫沉淀蛋白的鑒定;

    6.免疫印跡的第一步;

    7.蛋白質(zhì)修飾的鑒定;

    8.分離和濃縮用于產(chǎn)生抗體的抗原;

    9.分離放射性標(biāo)記的蛋白質(zhì);

    10.顯示小分子多肽。

    SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳有效分離范圍取決于聚丙烯酰胺的濃度和交聯(lián)度,其孔徑隨著雙丙烯酰胺與丙烯酰胺比率的增加而減小,比率接近于120時,孔徑達(dá)到最小值。分子量低于10kD的小分子肽類,即使用較高濃度的聚丙烯酰胺凝膠的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳也不能完全分離,或是顯不出色,或是顯帶較弱,帶型彌散。且分子量越小,效果也越差。

      

    為了能在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳上顯示測定小分子量的多肽,通常采取兩種方法:一是增加凝膠的濃度和交聯(lián)度,在制膠時加入一些可以降低聚丙烯酰胺凝膠網(wǎng)限孔徑的溶質(zhì)分子,使用尿素、甘油或蔗糖等物質(zhì);二是選擇緩沖液中的拖尾離子的種類和濃度以達(dá)到改善多肽的分離效果

     

    SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳測試的常見問題:

    Q1、如何讀取SDS-PAGE結(jié)果

    電泳后肉眼無法觀察到蛋白分離,需要后續(xù)的染色技術(shù)。考馬斯亮藍(lán)染色和銀染是常規(guī)檢測和定量電泳分離蛋白質(zhì)的常用方法。經(jīng)過固定-染色-脫色等簡單處理后,可以清楚的觀察到蛋白質(zhì)的分布。

    Q2、如何儲存SDS-PAGE凝膠

    通常在每次實驗之前準(zhǔn)備新鮮的SDS-PAGE凝膠。然而凝膠也可以在4℃的清水的儲存約一周。如果凝膠染色后不能及時拍照,則需要將其放入水中,以防止凝膠干燥和收縮。建議盡快拍攝染色結(jié)果,如果凝膠長時間浸泡在水中,條帶會散開。


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