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熒光定量PCR的優(yōu)點(diǎn)和檢測(cè)方法盤點(diǎn)

來(lái)源：測(cè)試GO 時(shí)間：2022-11-03 11:37:47 瀏覽：3766次

熒光定量PCR檢測(cè)有以下優(yōu)點(diǎn)：

1.高靈敏性：可檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞基因；

2.高特異性和精確性：將DNA雜交的高特異性和光譜技術(shù)的高精準(zhǔn)性融合，應(yīng)用熒光探針和光電傳導(dǎo)，直接探測(cè)基因擴(kuò)增過(guò)程中熒光信號(hào)的變化，以獲得定量結(jié)果，相當(dāng)于在PCR反應(yīng)過(guò)程中自動(dòng)完成了Northern雜交；

3.操作簡(jiǎn)便、速度快：通過(guò)計(jì)算機(jī)和分析軟件實(shí)現(xiàn)PCR擴(kuò)增、產(chǎn)物檢測(cè)和定量分析一體化；

4.安全、無(wú)污染：FQ-PCR在全封閉狀態(tài)下進(jìn)行PCR擴(kuò)增和產(chǎn)物分析，杜絕了傳統(tǒng)PCR開放檢測(cè)對(duì)環(huán)境的污染和由此導(dǎo)致的假陽(yáng)性；

5.結(jié)果觀測(cè)重復(fù)性好：一起在線實(shí)時(shí)觀測(cè)，結(jié)果判斷直觀，避免人為因素干擾。

內(nèi)參基因ACTIN(溶解曲線)

熒光定量PCR檢測(cè)的兩種方法：

1.SYBR GreenⅠ法：

在PCR反應(yīng)體系中，加入過(guò)量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺?/span>DNA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。

2.TaqMan探針?lè)ǎ?/span>

探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收;PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成完全同步。

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