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免疫電鏡測試（IEM）

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項(xiàng)目介紹

免疫電鏡技術(shù)是組織樣品經(jīng)低溫脫水滲透LR White樹脂低溫聚合包埋，超薄切片70-80nm，用特異性一抗與待檢測抗原結(jié)合然后用帶有膠體金標(biāo)記的二抗與一抗抗原復(fù)合物結(jié)合，在電子顯微鏡下觀察，由于二抗上的膠體金形成一定的電子密度而精確指示出相應(yīng)抗原在亞細(xì)胞水平上的定位。

樣品要求

免疫電鏡技術(shù)成功的關(guān)鍵是：①對(duì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的完好保存；②保證被檢細(xì)胞或其亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的抗原在原位，其抗原性不受損失；③選擇的免疫試劑能順利穿透組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)與抗原結(jié)合。該技術(shù)主要用于病毒、細(xì)菌等抗原定位、免疫性疾病的發(fā)病機(jī)理及超微結(jié)構(gòu)免疫細(xì)胞化學(xué)研究等。

具體操作方法1、1-3min內(nèi)取樣，取樣組織1mm3大小。取材前可提前準(zhǔn)備裝有免疫電鏡固定液A液的培養(yǎng)皿，將小組織塊離體取下后立即投入培養(yǎng)皿內(nèi)，用手術(shù)刀在培養(yǎng)皿的固定液中進(jìn)行切割成1mm3的小組織塊。再將切割好的小組織塊轉(zhuǎn)移至裝有新的免疫電鏡固定液的EP管內(nèi)繼續(xù)固定。 2、取材時(shí)盡量精確到需要觀察的目的部位(如觀察腎小球取腎皮質(zhì);觀察胰島取胰島豐富的胰尾;皮膚，腸胃等在固定液中易打卷的組織可將組織粘在濾紙上進(jìn)行固定)。 3、取材時(shí)一定注意避免鑷子擠壓等機(jī)械損傷，刀片要鋒利避免挫傷組織。 4、組織取下后立即投入免疫電鏡專用固定液，4℃保存，4℃冰袋運(yùn)輸，在保存和運(yùn)輸過程中固定液切勿冷凍結(jié)冰。樣品固定后應(yīng)盡快安排做后續(xù)包埋和免疫標(biāo)記實(shí)驗(yàn)，減少抗原丟失的可能性。5、結(jié)果觀察圖像采集：在透射電子顯微鏡下觀察并采集圖像，黑色10nm大小的金顆粒即為陽性表達(dá)。

項(xiàng)目案例